描述
新品!比原有PowerClean® DNA Clean-Up Kit快一倍。
PowerClean® Pro DNA Clean-Up Kit使用了專利抑制因子去除技術(IRT)為科研工作者提供創新手段純化粗提基因組DNA。與原有的PowerClean® DNA Clean-Up Kit相比極大優化純化過程,更少的操作步驟,前后只需7min。無色透明的DNA樣品可能也會含有PCR抑制因子,而呈現琥珀色到棕色,含有大量腐植酸和多酚等PCR抑制因子的粗提DNA也能通過本試劑盒純化。PowerClean® Pro DNA Clean-Up Kit能去除這種棕黑色以及腐植酸、亞鐵血紅素、多糖、多酚、富哩酸、脂質、染料等PCR抑制因子。獲得的高純度DNA可直接用于PCR、qPCR和第二代測序等要求苛刻的下游應用。本試劑盒已通過各種問題土壤粗提DNA和摻入商品化腐植酸檢驗。甚至對各種來源DNA樣品都表現良好。
存檔DNA或粗提DNA樣品與我們的專利DNA Clean-Up試劑盒混勻,抑制因子被選擇性地從DNA溶液中去除。所有DNA被離心柱的硅膠濾膜吸附,然后被洗脫下來。DNA的回收率會因影響DNA濃度檢測的抑制因子含量不同而有差異。最終DNA可直接用于PCR分析或其它下游應用。建議使用Picogreen法或電泳定量檢測DNA回收率。
研究與深入
A.
[起始] |
[PowerClean® Pro] |
[Zymo OneStep™] |
B.
樣品 |
起始樣品 |
PowerClean® Pro DNA |
Zymo OneStep™ |
ng/μl |
311.27 |
76.85 |
143.24 |
260/280 |
1.36 |
1.95 |
1.55 |
260/230 |
0.84 |
2.04 |
1.18 |
C.
|
[起始] |
[PowerClean® Pro] |
[Zymo OneStep™] |
圖1。 去除DNA中的腐殖質。分別用PowerClean® Pro DNA Clean-Up Kit或Zymo Research OneStep™ PCR Inhibitor Removal Kit純化過的樣品,用1.2% TAE凝膠電泳檢查結果。除了純化方法外,所有樣品的濃度、質量和DNA分子量都一樣。使用的是NanoDrop 1000分光光度計定量檢測DNA(B)。從數據可觀察到起始樣品濃度很高,但260/280及260/230比值都較低,表明腐殖質之類的雜質在A230有較高吸光值。經過PowerClean® Pro DNA Kit純化過后,260/280及260/230比值上升至與純DNA樣品持平,DNA濃度降到平均76.85ng/μl(定量檢測數字由Qubit Picogreen分析法所得,數據為列出)。經過OneStep™ Kit純化的樣品,260/280及260/230比值仍舊偏低,表明抑制因子依然存在。腐殖質的存在使得起始樣品呈現棕黑色(C)。經過PowerClean® Pro DNA Clean-Up Kit的純化,樣品變干凈了。然而,經過OneStep™ Kit處理的樣品仍帶棕色,表明未能去除所有抑制因子。
圖2。成功進行qPCR擴增。 圖1中描述的DNA通過桿菌16s法qPCR(使用兩種不同方法純化的1μl DNA原液或10倍稀釋液)。經過PowerClean® Pro DNA Kit純化的DNA成功擴增,DNA原液和10倍稀釋液之間約差3個循環,表明DNA不再含有抑制因子。而經過Zymo OneStep™ Kit處理的樣品仍無法擴增,10倍稀釋液的Cq值要大于PowerClean® Pro的,表明樣品中仍有抑制因子。