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 土壤
Q. 從土壤中提取DNA平均得率是多少？
A. 土壤DNA得率受多種因素影響，如質地、水分、pH值、碳含量及采樣土層深度等，使得率難以預計。堆肥和上層表土得率最高，粘土和底泥得率最低。在我們實驗室，每0.25g肥沃土壤常能獲3-6μg DNA。相當于12-24μg DNA每克土樣。曾經提取過最豐富的土樣類型，能獲得10μg DNA每0.25g土樣。而粘土、砂土、底泥沉積物及某些類型的農業土壤，每0.25g只能獲得250-500ng DNA。
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Q. 預計能從土壤中獲得多少RNA？
A. 通常土壤RNA得率遠低于DNA，約為后者的10~20%。詳見上文DNA平均得率。
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Q. PowerSoil® 和 PowerLyzer™ PowerSoil® Kit有什么區別？
A. PowerSoil® DNA Isolation Kit (貨號：12888)和PowerSoil® DNA Isolation Kit (貨號：12855)主要區別在于研磨珠套管。PowerSoil® Kit用的是0.7mm石榴石研磨珠，而PowerLyzer™ PowerSoil® Kit用的是0.1mm玻璃研磨珠。根據你的土樣類型、研磨速度和研磨設備來選擇該用哪款盒子。首次拿到土樣，建議用兩種類型的研磨珠，做梯度研磨速度比較，看哪個條件在保證DNA完整性情況下獲得最高得率。通常使用桌面研磨設備（如PowerLyzer™ 24 High powered Benchtop Homogenizer）用玻璃研磨珠，以3200rpm提取DNA，可獲得最大的DNA得率和最好的完整性。而用一般的渦旋儀，兩種研磨珠無顯著差異。檢驗DNA得率建議同時跑電泳和測OD。因為小片段DNA會抬高260nm讀數，所以不能作唯一評判標準。詳細試驗報告點擊 這里和 這里。 |
Q. 應該用哪種方法研磨我的土壤樣本？
A. 再次回答這個問題。最好的研磨方法因土樣而異。新土樣最好能用兩種不同的研磨珠以及提取研磨速度做提取比較，找出DNA完整性最好且得率最高的方案。一個通用法則就是，對于疏松、顆粒狀和富含有機質的土樣從較低轉速開始嘗試（PowerLyzer™24 High Powered Beachtop Homogenizer上2500rpm 45s一個循環）；粘土從較高轉速開始（嘗試（PowerLyzer™24 上4000rpm 45s一個循環）。玻璃研磨珠在高速珠磨研磨（>3500）環境下能保證DNA完整性前提下獲得更高得率。最終DNA分析建議結合凝膠電泳和測OD值。較高的OD值并不一定代表好的結果，大量破碎的小片段DNA會推高260nm讀數。詳細試驗報告點擊 這里。 |
Q. 如何獲得最高的土壤DNA得率？
A. 為了獲得土樣最高DNA得率，建議使用PowerLyzer™ PowerSoil® DNA Isolation Kit (貨號：12855-50)結合高速珠磨研磨機PowerLyzer™ 24 High powered Benchtop Homogenizer (貨號：13155)。大量不同類型土樣試驗點擊 這里。對不用微生物豐度土樣進行各種研磨方案比較，最終發現玻璃研磨珠（0.1mm）結合PowerLyer™24能獲得最大的DNA得率，高碳含量土樣除外。通過增加加樣量至500mg也可能可以提高DNA得率。但注意必須保證珠磨研磨時有足夠液體。必要時每管加入100-200μl裂解緩沖液（貨號：12855-50-BS，另售）。高水分含量的樣品，可先離心并盡可能去掉上清�？傊粭l，保證珠磨研磨并離心后，可轉移的上清不少于400μl且不多于600μl。詳見 應用報告 |
Q. 我要檢測土樣中的真菌DNA。如何確保孢子都被裂解了
A. 要增強對孢子、格蘭性陽性菌等難裂解微生物的破壁效果，可以在珠磨研磨前，對加到了含裂解緩沖液的研磨珠套管65℃水浴10分鐘。
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Q. PowerFecal® DNA Isolation Kit與PowerSoil® DNA Isolation Kit有什么區別？
A. PowerSoil® DNA Isolation Kit (貨號：12888-50)和PowerFecal® DNA Isolation Kit (貨號：12830-50) 含有一樣的化學試劑，使用的都是0.7mm石榴石研磨珠。PowerSoil的研磨珠套管以預灌裂解緩沖液，PowerFecal的裂解緩沖液單獨包裝，使用前加入。另外，PowerFecal針對糞便樣品對了一個65℃水浴加熱的步驟，可增加糞便樣品DNA的得率。
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Q. PowerFecal® DNA Isolation Kit可以與PowerSoil® DNA Isolation Kit互換使用嗎？
A. 可以，PowerSoil® DNA Isolation Kit (貨號：12888-50)和PowerFecal® DNA Isolation Kit (貨號：12830-50) 含有一樣的試劑，可互換提取土壤或糞便樣品。PowerSoil® DNA 的Bead Tubes預灌了Bead Solution,而PowerFecal® DNA Isolation Kit的Bead Solution單獨包裝，用戶使用前自己加入。另外PowerFecal® DNA Isolation Kitd的說明書中多了 渦旋研磨前的水浴步驟（65℃10min）。腐植酸含量很高的樣品不建議加熱樣品。只建議糞便樣采用。
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Q. 我能增加土壤加樣量嗎？
A. PowerSoil® DNA Isolation kits最好加入不超過250mg的土樣。然而，如果你的土樣水分含量很低，也有可能可以最多加到500mg。過大的土樣體積有可能使得珠磨研磨過程水量不夠。以研磨離心后可轉移的上清至少有400μl為下限。必要時也可以單獨購買裂解緩沖液（貨號12855-50-BS），每管加入100-200μl
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Q.我在使用PowerSoil® DNA Isolation Kit提取低生物豐度的砂土。如何提高得率？
A. 對于生物豐度低、腐植酸含量也低的土樣，你可以簡化Inhibitor Removal Technology®(IRT) 步驟。具體說，C2溶液減少到100μl，然后直接加100μl C3溶液，4℃孵育5min，接著進行C3后面的步驟�？珊喕赡芙档虳NA得率的步驟。因為溶液容量減少了，珠磨研磨離心后的600μl上清都可以轉移來提DNA。
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Q. 如何確定使用MOBIO的土壤DNA/RNA提取盒子的核酸提取效率？
A. 人們常問我們，如何提取土樣中的所有DNA，尤其是那些低得率類型的土樣。因為土樣特性不一而終，pH值、腐植酸、碳含量，所以最好能用試劑盒提取一個已知細菌含量的樣品，作為標準對照。你可以提1mL大腸桿菌純培養。已知1mL大腸桿菌過夜培養液大約含109個細胞，或者說大約5μg DNA。取新鮮過夜大腸桿菌培養液離心去掉上清，100μl PBS緩沖液重懸，加入到土樣中，孵育10分鐘過后進行提取。
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Q. 使用PowerSoil® DNA Isolation kit提取土壤DNA。說明書上說加入C2溶液并離心后最多只轉移其中600μl上清到一個新的Tube管中。實際操作上發現上清不止600μl�？梢赞D移所有上清嗎？我不想丟棄任何DNA。
A. 你可以轉移多于600μl的上清液。不過，C3步驟后轉移的上清量不能超過750μl，否則關鍵溶液C4將沒辦法全加進去。如果你發現C3步驟后上清液太多，可以在提取DNA開始前先取出200μl Bead Beating Tube中的裂解緩沖液。要是土樣本來含水量很高，也可以在加樣前先行離心，盡可能去除游離水分。
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Q. 使用MOBIO的PowerSoil® Total RNA kit發現RNA有降解，怎么辦？
A. 建議在加入Bead Solution、SR1、SR2到Tube管之后，就馬上加入苯酚溶液。不要等樣品化凍。有些樣品含有大量死細菌和RNase，RNA特別容易降解。
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Q. PowerSoil試劑盒上說只提取DNA，但我并沒看到RNA清除步驟。有這樣的措施嗎？我該在什么時候加入RNase？
A.這款試劑盒不帶RNase，因為硅膠離心柱不會吸附低分子量核酸，RNA會被沖洗掉。通常點用上極少會看到可見的RNA。但個別情況下有可能殘留少量RNA。如果下游實驗需要絕對去除RNA，可在實驗開始的時候往研磨管中加入1μl RNase。
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Q.我們實驗室沒有大型的珠磨研磨機，而且我的土樣得率很低，怎么破？
A.是的，對于低微生物豐度的樣品我們有修改版的說明書通過加入苯酚：氯仿：異戊醇，pH7-8 和100%乙醇，可以提高DNA的得率。具體請聯系anbiosci@126.com
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微生物
Q. 使用UltraClean Microbial DNA Isolation Kit 微生物DNA提取試劑盒的一般得率是多少？
A. DNA得率會隨著微生物類型不同和生長情況變化而變化。通過Nanodrop測定，一般1.8ml純培養的得率，大腸桿菌為14μg、糞腸球菌11μg、枯草桿菌5μg、白念珠菌μg。上述數值可能包含少量RNA。
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Q. 我想從受感染組織中提取微生物DNA，應該使用哪款試劑盒？
A. 雖然UltraClean Tissue & Cells DNA Isolation Kit組織細胞DNA提取試劑盒起初是設計用于體細胞DNA的提取，但它同樣適合用于微生物細胞。珠磨研磨步驟中使用的0.7mm石榴石研磨珠，能很好地裂解革蘭氏陰陽性菌和真菌。為了最大限度減少組織細胞基因組DNA，可省略蛋白酶K消化步驟。
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Q. UltraClean® Microbial DNA isolation Kit既能提基因組DNA也能提質粒DNA嗎？
A. 雖然UltraClean® Microbial DNA isolation Kit專門對提基因組DNA進行了優化，但也會共分離質粒DNA。通常小片段DNA和RNA（< 3kb）綁定效率不高。通過下面可選步驟可提高小分子量核酸的回收率。常規提450μl微生物裂解物需要加入900μl MD3，此時增加MD3用量至1.2ml。請電泳檢測最終提取效果。
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Q. 我用 UltraClean® Microbial DNA Isolation Kit處理大量樣本。哪一個步驟可以中間暫停？
A. 加入MD2后可暫停實驗。把樣品4℃存放數小時至過夜都沒有問題。
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Q. 我在用UltraClean® Microbial DNA Isolation Kit，而最終DNA的260/280、260/230比值總有問題。我該如何提高洗脫DNA的濃度？
A. 洗脫前用MD4溶液或80%乙醇作二次沖洗。然后延長13000g離心時間至2min，以充分甩干殘留沖洗緩沖液。洗脫前晾干離心柱。
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Q. 使用UltraClean Microbial DNA Isolation Kit 微生物DNA提取試劑盒的一般得率是多少？
A. DNA得率會隨著微生物類型不同和生長情況變化而變化。通過Nanodrop測定，一般1.8ml純培養的得率，大腸桿菌為14μg、糞腸球菌11μg、枯草桿菌5μg、白念珠菌μg。上述數值可能包含少量RNA。
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水樣
Q. 我應該用PowerWater®還是 RapidWater®DNA Isolation Ki？
A. PowerWater® DNA Isolation Kit使用了我們的專利Inhibitor Removal Technology® (IRT)技術，非常適合含有大量溶解有機物和重金屬的渾濁水樣。如果你的水樣來自于干凈的地下水或飲用水，使用RapidWater™ DNA Isolation Kit可更快速簡單地提取到DNA。若你仍不能確定該用哪款產品，那推薦首選PowerWater® DNA Isolation Kit。
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Q. 我可以用自己的水樣濾膜嗎？還是說只能訂購MOBIO的？
A.
我們的水樣提取試劑盒可適應包括聚醚砜、醋酸纖維素、硝化纖維和聚碳酸酯等在內的各種商業化濾膜。只要濾膜直徑不大于47mm，就都能兼容MOBIO的 PowerWater®和RapidWater™ DNA Isolation Kit。
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Q. 使用 PowerWater® DNA Isolation kit能同時提取DNA和RNA嗎？
A. PowerWater® DNA Isolation kit專門優化用于提取DNA。提取濾膜RNA，建議使用PowerWater® RNA Isolation Kit（MO BIO貨號：14700）。想同時提取DNA和RNA，用PowerWater® RNA Isolation Kit提取時省略說明書上的19-23步。
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Q. PowerWater® DNA Isolation kit只能提取水樣濾膜的DNA嗎？過濾空氣的濾膜能提不？
A. 能，PowerWater® DNA Isolation Kit可以提取所有微生物濾膜，無論液體還是空氣。還做過尿液、下水道污水、污濁空氣和油井油污水。
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Q. 我可以用PowerWater® DNA Isolation Kit提取其它類型的濾膜嗎？比如說Millipore的Sterivex™或SteriPak™。
A. 可以的。Sterivex™和SteriPak™的濾膜都能用PowerSoil®或RapidWater™提取DNA。需要事先破開過濾裝置容器，取出濾膜，剪碎后放入試劑盒Bead Tube中。另，貨號為14600的試劑盒可無需破開Sterivex™的過濾裝置，直接提取濾膜中的微生物DNA。
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Q. 我有一些冷凍的水樣，可以用PowerWater® DNA Isolaiton Kit提取嗎？
A. 反復凍融的水樣中的微生物也會遭受破壞，這將導致其無法通過過濾吸附到濾膜上，從而可能損失部分核酸。小體積的水樣（如經過沉淀或離心的濃縮水樣）可用PowerSoil®或PowerMax® DNA Isolation Kit（MOBIO貨號12888、12988）�；蛘呖梢园阉畼舆^濾到濾膜上再行冷凍。有些人直接把過濾好的濾膜放進PowerWater®的Bead Tubes，冷凍保存，需要提取的時候就無需轉移了。
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Q. 提取前如何保護水樣中的DNA？
A. 最好的保存方法是濾膜過濾水樣，放進干燥的PowerWater® Bead Tube中，-20℃保存。如果沒條件冷凍，濾膜過濾后放入Bead Tube保存前用真空泵盡可能抽干。
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Q. 我沒辦法把大量水樣帶回實驗室處理。在野外，有好的辦法收集水體微生物到濾膜上嗎？
A. 我們很多客戶在采樣點用Sterivex Filter Units過濾大量的水（1-10L）。建議使用PowerWater® Sterivex DNA Isolation Kit快速方便地提取Sterivex Filter Units高質量基因組DNA。
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Q. 我們使用PowerWater® Sterivex™ DNA Isolation Kit需要用到vacuum manifold嗎？
A. 是的，需要使用vacuum manifold幫助裂解物吸附到過濾柱上。
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Q. 我的水樣過濾在Sterivex™ units中，并加入SET（蔗糖、EDTA、Tirs）裂解緩沖液保存。還能用PowerWater®Sterivex™ DNA Isolation Kit提它的DNA嗎？
A. 該緩沖液中的EDTA會跟試劑盒中的某些化學物起反應，影響抽提的正常進行。你需要先去掉SET緩沖液才能用MOBIO的PowerWater®Sterivex™ DNA Isolation Kit。EDTA會分解經冷凍的Sterivex濾膜上的微生物，裂解細胞的DNA游離在緩沖液中。建議干燥保存Units，提取時依照說明書步驟，能獲得比常規酶法更高的得率。詳細試驗報告點擊 這里。 |
Q. 我的水樣沒有過濾在濾膜上，而是濃縮成很小的體積。該用哪款試劑盒？
A. 可以有多種選擇。如果你主要為了研究其中的細菌DNA，可把水樣中的細胞沉淀下來，用我們的微生物試劑盒，如UltraClean® Microbial DNA Isolation Kit or the PowerLyser™ UltraClean® Microbial DNA Isolation kit來提。然而此方法對留在上清中的病毒DNA無效。你可以不經過濾用PowerWater® DNA Isolation kit提取。加入的裂解緩沖液減少200-400μl，使得珠磨研磨裂解離心后可用上清總量（裂解緩沖液+水樣）不多于600-650μl。
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Q. 有辦法用PowerWater® Sterivex™ DNA Isolation Kit從Sterivex Filters中提取RNA嗎？
A. 有的。我們有可選步驟用于使用PowerWater® Sterivex™ DNA Isolation Kit提取Sterivex Filters中RNA的辦法。請聯系技術部獲得相關步驟說明。
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Q. 從哪里可以買到Sterivex™ water filters？
A. Millipore Sterivex water filter units (Millipore 貨號：SVGPL10RC)可直接從Millipore或其代理商購買。
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Q. 沒有Luer-Lok® outlet公頭的Sterivex過濾器可以使用Sterivex™ water Kit嗎？
A. 可以的。只要這款Sterivex過濾器有公短嘴就能兼容這款試劑盒。只不過你需要想其它辦法封閉過濾器出口。有些客戶使用Hemato-Seal Capillary Tube Sealant（Fisher貨號：02-678）。另一個方法是切下一半注射器的蓋帽用作出口的封口帽。
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糞便
Q. PowerFecal® DNA Isolation Kit和PowerSoil® DNA Isolation Kit兩款試劑盒有什么區別？
A. PowerSoil® DNA Isolation Kit (貨號：12888-50)和PowerFecal® DNA Isolation Kit(貨號：12830-50)含有一樣的化學試劑，都是用了0.7mm的石榴石研磨珠。而PowerSoil® DNA 的Bead Tubes預灌了Bead Solution,PowerFecal® DNA Isolation Kit的Bead Solution單獨包裝，用戶使用前自己加入。另外PowerFecal® DNA Isolation Kitd的說明書中多了 一個65℃水浴步驟，可增加糞便樣品的DNA得率。
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Q. PowerFecal® DNA Isolation Kit可以與PowerSoil® DNA Isolation Kit互換使用嗎？
A. 可以，PowerSoil® DNA Isolation Kit (貨號：12888-50)和PowerFecal® DNA Isolation Kit (貨號：12830-50) 含有一樣的試劑，可互換提取土壤或糞便樣品。PowerSoil® DNA 的Bead Tubes預灌了Bead Solution,而PowerFecal® DNA Isolation Kit的Bead Solution單獨包裝，用戶使用前自己加入。另外PowerFecal® DNA Isolation Kitd的說明書中多了 渦旋研磨前的水浴步驟（65℃10min）。腐植酸含量很高的樣品不建議加熱樣品。只建議糞便樣采用。
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Q. RNA PowerSoil® Total RNA Isolation Kit和PowerMicrobiome™ RNA Isolation Kit有什么不一樣？
A. 兩款試劑盒都可以提取糞便或腸內容物RNA。RNA PowerSoil® Total RNA Isolation Kit起始加樣量是2g，用了15ml的Bead Tube和陰離子交換柱；The PowerMicrobiome™ RNA kit的起始加樣量是0.25g，使用了2ml的Bead Tube和硅膠離心柱。使得PowerMicrobiome™ RNA kit kit提取速度更快，跟簡便和省錢。提取過程中不用酒精沉淀。RNA PowerSoil® Total RNA Isolation Kit的提取原理使得你可以結合RNA PowerSoil DNA Elution Accessory Kit提取同一個樣品的RNA和DNA。雖然你也可以用PowerMicrobiome™ RNA kit同時提取到RNA和DNA，但必須根據需要分別用DNase或RNase消化。
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Q. 我想提取禽/鳥的排泄物DNA，該用哪款試劑盒？
A. 我們建議使用PowerLyzer™ PowerSoil® 或PowerSoil® DNA Isolation Kits。他們都有最強力的抑制因子去除步驟。前者使用了0.1mm玻璃研磨珠，在某些場合下能獲得比原型試劑盒PowerSoil®kit（0.7mm石榴石研磨珠）更高的得率。在它們之間進行選擇取決于樣品和微生物類型。很多研究糞便和腸內容物的客戶在渦旋振蕩前65℃水浴樣品10-15min以增強細胞裂解效果。
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Q. 我有一些保存在含1%β-巰基乙醇硫氰酸胍溶液（GTC）的糞便樣品。我可以用GTC代替Bead Tube中原有的裂解緩沖液嗎？
A. 不能，高濃度硫氰酸胍的緩沖液會影響抑制因子去除試劑發揮作用。最好先離心去掉上清緩沖液，再重懸到Bead Tube的裂解緩沖液中。
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Q. 我想同時提取一個糞便樣品中的DNA和RNA，該用哪款試劑盒？
A. 有兩種選擇可同時提取一個糞便樣品中的DNA和RNA。我們有RNA PowerSoil® Total RNA Isolation Kit (12866-25)結合另一款輔助DNA提取盒子（12867）可分別洗脫同一個柱子上的DNA和RNA。這款盒子最大加樣量是2g。你也可以用PowerMicrobiome™ RNA kit把DNA和RNA同時從硅膠離心柱上洗脫下來，后期根據需要用DNase/RNase消化處理。PowerMicrobiome™ RNA kit提取速度更快，價格更便宜。
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Q. 我按照人類微生物組計劃的操作指南提取糞便樣品，里頭提到了MOBIO的PowerSoil和"MOBIO Lysis Buffer"。我在網站上沒找到后者的鏈接。
A. 人類微生物組計劃的操作指南中提到的"MOBIO Lysis Buffer"指的是 我們的PowerSoil Bead Solution�？梢詥为氂嗁�，貨號為12855-50-BS，42ml裝。
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Q. 如何采集和保存用于DNA/RNA提取的糞便樣品？
A. 糞便微生物群落結構在室溫下長達兩周時間仍能保持穩定。所以，我們建議用Bead Tubes收集樣品，使用普通冰袋保溫運輸，并于-20℃冷凍保存。避免反復凍融。要了解更多細節，請查看 糞便樣品的保存與運輸 |
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植物
Q. 我可以用PowerPlant RNA Isolation Kit提取microRNA和siRNA嗎？
A.PowerPlant RNA kit只需對操作流程稍作修改就能很好地回收到小片段RNAs。為了加大mciroRNA和siRNA的回收率，在吸附RNA到離心柱上前的步驟，加大100%乙醇用量650μl。其它步驟不變。
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Q. 所有類型植物樣品都可以通過添加PSS（酚類分離溶液）來增加核酸得率嗎？
A. 不能。植物樣品酚類含量差異很大。有些植物樣品（如葡萄葉、草莓葉、番茄莖、松針）富含酚類復合物，嚴重影響DNA/RNA提取。加入PSS溶液能去除酚類復合物并提高核酸得率。然而，如果植物樣品酚類含量不高（如棉花種子、草葉、稻葉、薄荷葉），加入PSS反而會降低得率。不是所有植物樣品都富含酚類，因此是否需要添加PSS取決于研究的植物哪個部位。如果你能確定特性樣品酚類含量，做個對比實驗即可。
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Q. 我需要像其他大多數說明書描述的那樣，珠磨研磨前加熱樣品嗎？
A. 不必要。我們實驗發現使用PowerPlant Pro，并非所有樣品都要在珠磨研磨前水浴加熱。有些樣品比如棉花葉、草、松針和葡萄葉等加熱后還會降低得率。建議對你特定的樣品做加熱/不加熱對比實驗。
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Q. 我要提取木頭/根部的微生物DNA，正擔心樣品中可能富含的多糖多酚對DNA的影響。該用哪款適合？
A. 推薦使用PowerPlant Pro Kit。這款試劑盒使用的是2.38mm不銹鋼研磨珠，可以高效均質化植物樣品，裂解堅硬木頭/根部等堅硬類型樣品釋放出潛藏的微生物DNA。
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動物組織細胞
Q.我可以用BiOstic FFPE Tissue & Cells DNA Isolation Kit提取的DNA做第二代測序嗎？
A. 是的。用BiOstic FFPE Tissue & Cells DNA Isolation Kit提取的DNA能成功進行PCR、qPCR和第二代測序實驗。需要注意的是BiOstic FFPE Tissue & Cells DNA Isolation Kit能高效輕柔地去除影響下游實驗的污染物，過程對DNA質量沒有影響。如果FFPE組織切片中DNA已經降解，那么出來的DNA也不會有所改變。 |
Q. BiOstic FFPE Tissue & Cells DNA Isolation Kit可以提RNA嗎？
A. 可以。我們有可選操作步驟可以用BiOstic FFPE Tissue & Cells DNA Isolation Kit提取RNA。你需要對實驗做如下修改：
1)需要一種裂解緩沖液能在加熱溶解組織石蠟解除蛋白-DNA交聯提取過程中保護RNA。我們使用PowerBiofilm DNA Kit的BF2溶液（獨立貨號：24000-50-2）。每樣加200μl BF2 替代原來的FP1和FP2，然后加入20μl FP3,60℃消化1h。
2）降低去蛋白-RNA交聯溫度到70℃ 30min（提DNA需90℃ 60min）。此步只針對石蠟包埋樣品，福爾馬林固定的略過。
3）第七步加入FP4和1.5倍體積的100%酒精（300μl）代替原來的200μl FP5.若要增加miRNA和siRNAs的回收率，可適用2倍體積100酒精。
4)若只要RNA，可使用On-Spin Column DNase Kit（貨號：15100）在硅膠濾膜洗脫前移除基因組DNA。
或者用 BiOstic FFPE Tissue & Cells RNA Isolation Kit |
Q. 使用UltraClean Tissue & Cells RNA Isolation Kit提取組織RNA需要用到強力珠磨研磨設備嗎？
A. 不一定；但強力珠磨研磨是最快最簡單的方法。其它研磨方法可用液氮+手工研磨。RNA提取過程，必須快速研磨樣品，盡可能避免RNA過熱和降解。強力珠磨研磨設備還能一次處理大批樣品同時保持RNA的完整性。詳細試驗報告請點擊 這里。 |
Q.我可以用UltraClean Tissue & Cells DNA Isolation Kit提取昆蟲DNA嗎？
A. 可以，像昆蟲這樣堅硬的樣品請用試劑盒提供的蛋白酶K消化，并在高速珠磨研磨設備上3個20s循環（PowerLyzer™3100rpm，Fastprep 或 Precellys 6100rpm）。
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Q. 我想提取感染組織的微生物DNA，該選用哪款試劑盒？
A. 雖然UltraClean Tissue & Cells DNA Isolation Kit的設計是要提取體細胞DNA，但其實它也可以用來提微生物細胞。試劑盒所使用的0.7mm石榴石研磨珠可以有效裂解革蘭氏陰性細菌、革蘭氏陽性細菌，甚至真菌。為盡可能減少提取到組織DNA，請跳過蛋白酶K消化步驟。
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棉拭子
Q. 我想提取棉拭子上含PCR抑制因子的微生物DNA，有什么好建議嗎？
A. 有些棉拭子樣本含有PCR抑制因子。比如說直腸拭子的排泄物，環境表面的棉拭子。提取這類棉拭子的細菌DNA，建議使用BiOstic Bacteremia Kit。此試劑盒含有我們的專利IRT技術去除PCR抑制因子，還有強力的裂解緩沖液。使用這款試劑盒提取棉拭子，你需要做以下步驟：
1）加入450μl CB1緩沖液到MicroBead Tube中；
2）把棉拭子放入并在緩沖液中攪拌，浸泡數分鐘釋放其中的細胞；
3）可以的話摘下棉拭子頭部并留在Tube管里，否則把棉拭子按壓Tube管壁盡可能擠出水分，丟棄棉拭子。
4)進行70℃水浴步驟，余下步驟正常操作。
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Q. 我想提取收集在棉拭子上相對比較干凈含極少PCR抑制因子樣品的微生物DNA，有什么好建議嗎？
A. 不含PCR抑制因子的樣品建議用UltraClean Tissue and Cells DNA Isolation Kit。它有2ml研磨珠套管和強力裂解緩沖液高效裂解原核細胞。使用這款試劑盒提取棉拭子，你需要做以下步驟：
1)加入700μl TD1溶液到2ml Bead Tube中；
2）把棉拭子放入并在緩沖液中攪拌，浸泡數分鐘釋放其中的細胞；
3）可以的話摘下棉拭子頭部并留在Tube管里，否則把棉拭子按壓Tube管壁盡可能擠出水分，丟棄棉拭子。
4）渦旋混勻破碎處理，余下步驟正常進行。
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Q.我想提取收集在棉拭子上含有PCR抑制因子的人類/宿主DNA。有什么好建議嗎？
A. 如果樣品含有大量抑制因子，而你想要的是人類DNA（比如說，棉拭子采樣前該人忘記禁食），建議使用BiOstic Bacteremia Kit。此試劑盒含有我們的專利IRT技術去除PCR抑制因子，還有強力的裂解緩沖液。用這款試劑盒提取棉拭子，你需要做以下步驟：
1）不要用Bead Beating Tube。加入450μl CB1溶液到一個標準2ml 小型離心管中，放入棉拭子并攪拌，浸泡數分鐘釋放細胞。
2）棉拭子按壓離心管壁，盡可能擠出水分，丟棄棉拭子。
3)渦旋混勻10s，70℃水浴15min。另外，你可以可以加入10μl蛋白酶K來加強細胞裂解。
4）加入100μl能去除PCR抑制因子的CB2溶液，余下步驟正常進行。
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Q. 我想提取收集在棉拭子上相對干凈不含PCR抑制因子的人類/宿主DNA。有什么好建議嗎？
A. 如果你要提取棉拭子上不含PCR抑制因子的真核生物/宿主DNA，建議用Blood Spin DNA Kit。使用這款試劑盒提取棉拭子，你需要做以下步驟：
1）把棉拭子浸泡在400μl TE緩沖液中（10mM Tris，1mM EDTA)；
2)棉拭子浸泡在緩沖液中數分鐘釋放細胞；
3）可以的話摘下棉拭子頭部并留在Tube管里，否則把棉拭子按壓Tube管壁盡可能擠出水分，丟棄棉拭子。
4)加入400μl B1溶液，再加入10μl 蛋白酶K，60℃水浴消化30min；
5)若棉拭子頭部還在Tube管中，貼壁按壓擠出水分，丟棄。加入800μl B2溶液（100%酒精），用兩個離心柱，每管加入600μl上述溶液，綁定DNA到離心柱上；
6）余下步驟正常進行。
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Q. 我想提取口腔或排泄物棉拭子RNA，該用哪款產品？
A. PowerMicrobiome RNA
Isolation Kit設計用于快速簡便提取富含PCR抑制因子樣品的總RNA。Bead Tube加入650μl PM1/βME溶液，再放入冷凍的棉拭子，任其融化。
2）在緩沖液中攪動棉拭子，浸泡數分鐘釋放細胞
3)可以的話摘下棉拭子頭部并留在Tube管里，否則把棉拭子按壓Tube管壁盡可能擠出水分，丟棄棉拭子。余下步驟正常進行。
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生物薄膜
Q. 什么樣的樣品才需要用到PowerBiofilm DNA Isolation Kit？
A. 生物薄膜（Biofilms）可以在水管里頭、瀉湖巖石、小溪巖石上找到，多重生物薄膜層疊稱作生物墊（Microbial Mats）。生物薄膜由多種細菌不可逆地與胞外聚合物（EPS）粘連而成。EPS基質吸附大量腐殖質、重金屬、鹽類和殺蟲劑等，使得生物薄膜中的微生物很難裂解，且核酸與抑制因子極易交聯。這也是市面上大多數商業化核酸提取試劑盒未能成功的原因。PowerBiofilm® DNA/RNA Isolation Kit提取核酸前有專門的biofilm預處理步驟，結合強力的細胞裂解緩沖液和專利IRT®技術，最終可獲得高質量不含抑制因子的DNA和RNA。詳細試驗報告請點擊 這里。 |
Q. PowerBiofilm 和PowerSoil Kit有什么不同？
A. PowerBiofilm DNA Isolation Kit含有一種獨特化學試劑用于溶解生物薄膜上的EPS，還有混搭研磨珠套管專門裂解微生物墊。兩個盒子都有IRT技術，使用了二氧化硅濾膜離心柱回收DNA。更多深入了解兩者區別請點擊 這里。 |
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食物
Q. 我想提取發酵乳制品中的DNA，然后做DGGE分析。該用PowerFood還是PowerMicrobial DNAIsolation Kit？
A. PowerFood Microbial DNA Isolation Kit更擅長去除牛奶中的抑制因子，推薦用它來提取發酵乳制品DNA。
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Q. 我想提從未經培養的食物樣品(面包面團、牛奶、果汁、狗糧、啤酒等）提取真菌DNA。樣品含有大量淀粉、蛋白和脂肪等抑制因子�？梢杂肞owerFood Microbial DNA Isolation Kit嗎？
A. 是的，你可以用PowerFood Microbial DNA Isolation Kit提取固體、液體樣品（富含抑制因子）微生物DNA。詳情可見試劑盒說明書的疑難點。
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病毒
Q. 我們想用MOBIO 的PowerWater DNA Isolation Kit提取水樣中的病毒DNA/RNA�？墒遣《绢w粒太小，無法用0.2μm水樣濾膜捕捉。我該用哪款試劑盒？
A. 要提取液體中病毒的DNA/RNA，需要把液體濃縮到一個很小的體積。建議至少濃縮到200μl以下以免稀釋掉裂解緩沖液。對于水樣的濃縮，可以用一款經過MgCl2特殊處理的0.02μl孔徑氧化鋁濾膜或其它帶正電荷高吸附性的介質。請詳細我們的 博文了解更多內容。 |
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PowerMag 試劑盒
Q. 我們想用MOBIO 的其中一款PowerMag試劑盒，但實驗室沒有epMotion或KingFisher的機器。有另外一款類似的儀器，可以嗎？
A.也許可以。我們沒有其它機器的程序文件，但有個簡化版的機器指令PDF文檔。如若需要可以發給你，然后修改相應程序以適應你的機器。有更多問題，請隨時聯系技術部。
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Q. 我現正使用一款針對KingFisher機器定制的PowerMag 試劑盒。機器運行的程序版本是3.1，能識別的操作說明書格式是".msz"�？蒑OBIO網站上下載到的文件格式是".bdz",還能用嗎 ？
A.你需要聯系Fisher Scientific獲取最新版本的程序來識別bdz文件。目前沒有軟件可以相互轉換msz和bdz
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其它
Q. MOBIO的試劑盒保質期有多長？
A.MOBIO生產的所有試劑盒都有保質期標注在包裝盒上。如果你只有一瓶單獨的組分，請告訴技術支持該組分的批號，我們可以告訴你具體保質期。使用過期產品可能影響使用效果。
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運輸
Q. 我使用MOBIO的其中一款DNA提取試劑盒提取DNA�，F在需要把DNA長途運輸到目的地�？梢蕴峁╆P于DNA保存的技巧嗎？
A.運輸途中，保存在離心管或96孔板中的重懸DNA，很容易降解或者交叉污染。為了避免出現這種情況，必須采取相應措施。地球微生物組計劃把保存在96孔板或離心管的DNA的 打包保存方法收集了一下，你也關注一下，挺有用的。 |
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儀器設備
Q. 什么是渦旋儀適配器？
A. 它是用來水平固定Tube管的渦旋儀附件�？墒箻悠帆@得高效、均一的研磨均質效果，取代人工點振法。MOBIO生產了一系列適合2-50ml不同大小Tube管的適配器。詳細介紹請點擊 這里。 |
Q. MO BIO的PowerLyzer™24是一款怎么樣的儀器？
A.PowerLyzer™24 Bench TopBead-Based Homogenizer是一款強力的珠磨研磨設備，專用于高效裂解均質化所有類型生物樣品�？梢栽诓坏�30s時間快速處理24個2ml 研磨管。結合MO BIO的高質量核酸提取試劑盒，可簡便快速提取任何堅硬、難提取的樣品，如松針、種子、孢子、真菌墊和皮膚組織等。
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Q. 新買的MO BIO適配器無法固定在渦旋儀上，怎么辦？
A. 很多新用戶未接觸過渦旋儀適配器，害怕用力過猛弄壞它。而安裝適配器需要一定的技巧，對齊接口往下按，聽到"咔"一聲即可安裝完成。請聯系QQ：85452068索取相關演示視頻。
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Q. MOBIO的適配器很難拔下來，怎么回事？
A. 如果你是新手沒接觸過渦旋儀適配器，卸載時需要一定的技巧。雙手拇指放在適配器黑色頂帽上，其余指頭在下，垂直往上頂，即可卸下適配器。切忌用力左右搖晃。請聯系QQ：85452068索取相關演示視頻。
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Q. 你們的適配器可以跟我現有的渦旋儀兼容嗎？
A.可能。我們的適配器數雖然設計搭配MOBIO的Vortex-Genie®； 一起使用，但一些其它渦旋儀也可能可以兼容。Fisher的渦旋儀型號是：02-215-365~ 02-215-376，還有VWR牌子的58816-121。也許其它型號的渦旋儀也使用，詳情請咨詢技術支持。
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Q. 我有Precellys®24，MoBio的PowerSoil® DNA Isolation Kit可用搭配使用嗎？
A. 可以的。雖然PowerSoil® DNA Isolation Kit專門優化配合MOBIO的PowerLyzer™ 使用，但也是可以用其它高速強力珠磨研磨設備的。詳見說明書速度轉換表。
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Q. 我有FastPrep®24，MoBio的PowerSoil® DNA Isolation Kit可用搭配使用嗎？
A. 可以的。雖然PowerSoil® DNA Isolation Kit專門優化配合MOBIO的PowerLyzer™ 使用，但也是可以用其它高速強力珠磨研磨設備的。詳見說明書速度轉換表
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DNA回收
Q. 使用UltraClean PCR Clean-up Kit回收DNA最小片段是多少？
A. 60bp
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Q. 使用UltraClean PCR Clean-up Kit回收DNA最大片段是多少？
A. 最大10kb.
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Q. UltraClean PCR Clean-up Kit會去除引物二聚體嗎？
A. 是的。小于50bp的DNA片段都會被清除掉。
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Q. 我需要回收大于10kb的DNA片段。有沒有合適的試劑盒？
A. 有的�；厥掌未笥�10kb的DNA，你可以用基于硅膠濾膜的UltraClean15（貨號12100-300）
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Q. UltraClean PCR Clean-up Kit回收PCR反應物，去除的都是哪些東西？
A. 鹽、引物、dNTP、radio-labels和酶
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Q. UltraClean PCR Clean-up Kit一次能回收多少DNA/PCR產物？
A. 經測試，硅膠濾膜DNA吸附上限是20μg。
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Q. 使用UltraClean PCR Clean-up Kit只能回收到很少或者甚至沒有DNA。怎么回事？
A. 好幾個地方都可能影響到。SpinBind使用前必須劇烈搖勻。是否有考慮到洗脫過程？SpinClean Wash Buffer的主要成分乙醇可能會揮發導致DNA提前洗脫。嘗試用新鮮SpinClean重新配制溶液。
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Q. 我的260/230比值很低（低于1.0），怎么回事？
A. 可能是胍鹽污染。沖洗過濾柱時，嘗試延長離心時間至2-5min。
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血液
Q. 我可以用BiOstic Blood Total RNA Isolation kit提取袖套細胞/白細胞沉淀RNA嗎？
A.
是的，你可以用BiOstic Blood Total RNA Isolation Kit提取袖套細胞或白細胞沉淀RNA。直接跳到步驟五，開始白細胞裂解。用300μl BR2溶液（含bME）充分重懸沉淀細胞團。
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Q. 哪款試劑盒最適合用來提取支原體？
A. 支原體缺乏細胞壁，因此無需機械裂解。推薦使用UltraClean BloodSpin DNA Isolation Kit。
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DNA純度、得率檢測及保存
Q. 提取后的DNA 260/230比值偏低(<1.5)，為什么會這樣？
A. 鹽酸胍污染是最常見引起230nm吸光度偏高的原因。此鹽溶液可幫助DNA吸附到過濾柱上。嘗試用沖洗緩沖液再次洗滌過濾柱。另一個引起260/230比值偏低的原因是抑制因子污染。若340nmn吸光值 > 0.1，則很有可能PCR等下游實驗已經無辦法進行。使用MO BIO PowerClean® DNA Clean-Up kit可高效去除抑制因子。
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Q. MO BIO的試劑盒中的洗脫緩沖液含有EDTA嗎？
A. 并非所有的客戶希望洗脫液中含有EDTA，所以我們只加入了Tris。為了延長DNA保存時間，你可以根據需要加入適當EDTA，使其最終濃度為1mM。請注意，EDTA會影響下游酶反應。10倍稀釋DNA可去除EDTA對酶反應的抑制作用。
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Q. 我加樣跑電泳時，DNA/RNA總是飄上來加不進去。怎么辦？
A.提取過程中，沖洗好spin filter上的DNA/RNA后，需要離心幾分鐘甩干過濾柱。若過濾柱未被充分甩干，殘留的酒精會使得樣品比重變輕而無法沉入電泳孔底�？赏ㄟ^標準的DNA濃縮程序去除其中的酒精污染。
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Q. 提取的土壤DNA 340nm吸光度偏高(>0.1)。為什么？
A. 剛提取的土壤DNA 340nm吸光度偏高，結合260/230(< 1.5) 偏低，表示腐植酸污染。下游PCR等工作有可能會被抑制。若PCR無法進行，嘗試10倍稀釋DNA原溶液。也可以用MO BIO PowerClean® DNA Clean-Up kit,在盡量少地損失DNA的情況下高效去除抑制因子。詳細試驗報告點擊 這里。
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RNA
Q. RNA提取試劑盒可以回收像micro RNA 和siRNA這樣的小分子RNAs嗎？？
A. 可以的，只要稍微修改一下說明書即可。標準的綁定液是由一份體積的綁定溶液（不同試劑盒，有可能是PM3、PR3、PWR3或BFR4），1體積100%乙醇，1體積裂解物，組成1：1：1混合物。為了減少RNA分子的剪切，你需要增加一份100%乙醇，混合物比例變成1：2：1。這樣，你就可以回收到樣品中的絕大部分RNA了。詳情請點擊相應 博文。 |
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