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        如何處理高鹽分土樣

        作者:Michelle Tetreault Carlson 來(lái)源:美國MoBio實(shí)驗室【字號:

        MO BIO技術(shù)部:

        我在使用RNA Power Soil Total RNA Isolation kit處理一些高鹽含量的土壤樣品,結果提取出來(lái)的全是DNA而不是RNA,這是怎么回事呢?

        Thao:

        您好!

        提取含鹽量高的土壤或其它類(lèi)型樣品需要些技巧。RNA PowerSoil Total RNA Isolation kit(貨號:12866-25)使用的是陰離子交換樹(shù)脂來(lái)吸附和洗滌核酸。在低鹽條件下,帶負電荷的RNA/DNA被牢牢吸附綁定在帶正電荷的樹(shù)脂上。高鹽條件下,它們彼此的極性會(huì )被掩蓋。通過(guò)調節離心柱所使用緩沖液的鹽濃度可控制RNA或DNA的洗脫。逐漸提高鹽濃度的過(guò)程中,先洗脫下來(lái)的是RNA,然后洗脫DNA。然而,如果處理的是高鹽含量的土樣,會(huì )改變樹(shù)脂所處的緩沖環(huán)境,這就是你現在面臨的狀況。土樣中殘留的過(guò)高鹽分導致最終洗脫下來(lái)的是DNA而非RNA。

        為了去除這些起干擾作用的鹽份,可以對土樣進(jìn)行洗滌。把樣品加入到15ml滅菌收集管中,再加入10ml滅菌PBS,短暫渦旋混勻,10,000 x g離心2min,棄上清。這樣重復洗滌3次,效果會(huì )好很多。

        祝好!

        MO BIO 技術(shù)

        金屬含量高的土樣也會(huì )影響試劑盒的提取效果,我們建議使用滅菌的TE緩沖液(10 mM Tris, 1 mM EDTA)對這種類(lèi)型的土壤進(jìn)行重復洗滌。在此,EDTA可起到螯合金屬離子的作用。操作同上,將TE緩沖液和樣品都加入到收集管內,渦旋混勻,然后離心沉淀細胞和土壤顆粒,棄去上清,根據實(shí)際需要可以多洗幾遍。

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