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        研磨珠的選擇

        來源:深圳市安必勝科技有限公司 轉載請注明出處【字號:

        當提到從各種樣品中提取DNA或RNA,最快速徹底的樣品處理辦法就要數研磨珠高速擊打破碎。無論研磨均質微生物、老鼠組織、植物種子或葉子,還是各種土壤,使用研磨珠都能有效打破細胞壁和細胞膜,釋放出DNA、RNA,供下游提取純化。

        目前市場上有大量各種類型研磨珠供選擇,使用者往往無從下手。本文總結歸納了在MoBio實驗室使用的各種研磨珠的特性,以及適合處理的樣品類型,供參考。

        在之前的文章,根據RNA提取的特點詳細地討論了該使用的研磨均質條件。今天將全面討論DNA、RNA提取過程中研磨珠的選擇。

        渦旋儀:

        通常在渦旋儀上使用研磨珠套管的情況最多。渦旋儀非常適合用于樣品DNA提取的研磨均質。因為它動作相對緩和,能最大程度上保持DNA的完整性。

        0.15mm石榴石(Garnet):用于提取微生物純培養的DNA,也適合于菌液的離心沉淀、水過濾物、尿沉淀,或敗血癥血培養。沙粒樣的石榴石顆粒表面粗糙不平,非常有利于細胞壁的破解。但其硬度相對比較低,在渦旋儀研磨擊打條件下,對DNA損傷較小。

        使用石榴石的試劑盒:我們在UltraClean® Microbial DNA Kit、PowerFood DNA Kit (0.5 ml tube) 和Bacteremia DNA Kit(2.0 ml tube)上使用此類型研磨珠

        0.7mm Garnet石榴石(Garnet):此種研磨珠由各種大小不一、表面粗糙不平、外形各異的鋒利小石塊組成。鋒利而堅硬,能有效破碎半固體狀及堅硬樣品。

        使用0.7mm石榴石的試劑盒:使用渦旋儀破碎

        2ml管動物組織樣品:UltraClean Tissue and Cells DNA Isolation Kit ;

        2ml管土樣樣品:UltraClean Soil、PowerSoil DNA Isolation KitsPowerFecal DNA Isolation Kit,

        15ml管:RNA PowerSoil Isolation Kit、 UltraClean Water DNA Isolation Kit

        50ml管:PowerMax Soil DNA Isolation Kit.

        0.15mm/0.7mm石榴石:Powerwater DNA Isolation KitsRapidWater DNA Isolation Kits的5ml研磨珠套管就使用了這兩款研磨珠混搭。更換成5ml厚壁管意味著不用折疊47mm水樣濾膜就能輕松塞進研磨管中。這里提供了更多水樣濾膜的選擇技巧。研磨珠的混搭可以最大程度地釋放濾膜表面及內陷的微生物到研磨管。

        0.25mm碳化硅:此款研磨珠均為鋒利的小薄片。薄片碳化硅能高效破壞微生物細胞,并剪切基因組DNA。通常用來制備RNA。

        使用0.25碳化硅研磨珠的試劑盒:我們使用此研磨珠在UltraClean Microbial RNA Isolation Kit 0.5ml 管中提取微生物RNA;還在Biostic Stabilized Blood RNA Isolation Kit上用于過柱吸附RNA前對基因組DNA進行破碎。此舉大大減輕了RNA制備的后期處理工作。

        渦旋儀或高速研磨機:

        玻璃研磨珠都能用在渦旋儀和高速研磨機上。而相對來說,其跟適合于后者。因為玻璃珠在高速研磨過程中不會發生崩解。

        0.1mm 玻璃珠:細小的玻璃珠直徑只有0.1mm。圓球外形非常堅硬,在強大外力作用下依然保持完整。是處理某些類型土壤(如:粘土、沉淀物和沙土)最理想的選擇。提取真菌、孢子DNA也能得心應手。適合渦旋儀和PowerLyzer使用。

        使用0.1mm玻璃珠的試劑盒:我們在PowerLyzer UltraClean Microbial DNA Isolation Kit 0.5 ml管和 PowerLyzer PowerSoil DNA Isolation Kit 2ml管中使用此研磨珠。更多關于有效提取粘土DNA的數據。

        0.5mm 玻璃珠:下一個要介紹的是0.5mm玻璃研磨珠。其球狀外形及高硬度同樣適合用于高速研磨機。不過我們尚未應用到試劑盒上。在提取菌類DNA及需要輕質大個研磨珠場合上比較適用。我們提供了2ml裝的研磨珠套管。

        高速研磨機上使用的研磨珠套管:

        下面的擊中研磨珠直徑較大,適合用于破碎堅硬樣品或者RNA的提取。因此,一般的渦旋儀不能滿足所需作用力。

        2.38mm 金屬研磨珠套管: 我們實驗室通常用來提取植物DNA。金屬研磨珠質地非常堅硬,在一般渦旋儀上可以用來提取柔軟的植物組織。而對于大部分植物樣品,在高速研磨機上使用能釋放出更多DNA。金屬研磨珠很好地應用于植物DNA提取的另一個原因是,植物DNA提取的裂解緩沖液中不含有腐蝕金屬球的離液鹽,不會導致其銹色。此研磨珠在我們的厚壁管中高外力情況下使用不會發生破裂。

        使用2.38mm金屬研磨珠套管的試劑盒:PowerPlant DNA Isolation Kit。

        1.4mm 陶瓷研磨珠套管:細小的陶瓷研磨珠提取幼小樣品RNA,有時比2.8mm研磨珠來得更有效率。經過試驗證明,對于所有類型植物和動物組織,2.8mm陶瓷研磨珠是最好用的。所以我們沒有把1.4mm陶瓷研磨珠應用在試劑盒上。但也不排除客戶有特殊應用。市場上商品化名稱有時會把陶瓷研磨珠稱為鋯石。而鋯石就是一種陶瓷材料。

        2.8mm陶瓷研磨珠套管:我們把此研磨珠應用于幾乎所有PowerLyzer系列的試劑盒上。2.8mm陶瓷研磨珠非常適合于提取各種動植物組織RNA。而且在提取RNA必須使用的高離鹽裂解液中不會生銹或變色。研磨珠已經預裝在厚壁管中。

        使用2.8mm陶瓷研磨珠的試劑盒:

        PowerLyzer UltraClean Tissue & Cells RNA Kit PowerLyzer UltraClean Plant RNA Kit。

        所有的研磨珠套管都可以單獨購買,以便于開發你自己的操作流程和嘗試新的混搭。為了節省你的經費,大部分研磨珠都有散裝銷售。厚壁管也可以單獨購買。

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